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4色方案,检测气道支气管上皮细胞

这是2017年1月发表在ScientificReports上的文章《Novelflowcytometryapproachtoidentifybronchialepithelialcellsfromhealthyhumanairways》,文章不复杂,方案中的抗体基本上都能想的到,但人家还是发了。在此借鉴一下吧。

在下呼吸道不同部位取材以检查人支气管上皮细胞(HBEC)对于了解许多肺部疾病至关重要。检测支气管肺泡灌洗液(BAL)和洗液(BW)中的HBEC的常规方法在效率方面存在通量限制,并且需要足够的细胞量才行。

流式细胞术可以高通量检测BAL和BW样品,同时细胞数量要求低。在这项研究中,作者提出流式细胞术方法成功检测出了HBEC(CD45阴性,EpCAM /泛细胞角蛋白(pan-CK)双阳性细胞群)。为了验证,将该方案应用于原代HBEC,得到98.6%的活细胞。在健康志愿者中,从BAL(2.3%的活细胞)、BW(32.5%)和支气管刷洗液样品(88.9%)中检测到的HBEC与手工显微镜计数密切相关(p = 0.0001)、Pearson相关系数为0.96。

因此,作者认为,该方法配合各种其它标记将有助于研究呼吸道上皮细胞在多种肺部疾病的作用。

方案

抗体 [克隆号] 厂商 目录号 用量

pan-cytokeratin FITC [C-11] Abcam ab78478* 3 μl

EpCAM PerCP-Cy5.5[EBA-1] BD Biosciences 347199 3 μl

CD45 APC-Cy7[2D1] BD Biosciences 557833 3 μl

FITC mouse IgG1 (Isotype control) BD Biosciences 555748 3 μl

PerCP-Cy5.5 mouse IgG1 (Isotype control) BD Biosciences 550795 3 μl

Fixable Viability Dye eFluor 450 eBioscience 65-0863-14 2 μl

*表示该货号目前已不可用,改成了ab11214.

设门方法

原代人支气管上皮细胞培养物验证设门方法。上面这行是浸泡物分析结果,下面这行是气液界面培养物分析结果。设门的五个图依次是通过FSC/SSC排除碎片、排除粘连体、选择活细胞、选择CD45-细胞、选择EpCAM和pan-CK双阳性细胞。最后这个门内细胞就是支气管上皮细胞。

从上到下三行图依次为:支气管肺泡灌洗液支气管冲洗液支气管刷洗液

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